基础知识

分光光度计工作原理及特点

分光光度计，又称光谱仪（spectrometer），是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200～380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱，因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱：钨灯光源所发出的380～780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱；该色谱可作为可见光分光光度计的光源。

分光光度计的简单原理

分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

分光光度计的基本工作原理

分光光度计的基本工作原理是基于物质对光（对光的波长）的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收光带，所以，当光色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸收。在一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度有一定的比例关系，即符合比尔定律。

T = I/Io lg（Io/I）=εcb

式中，T为透过率，Io为入射光强度，I为透射光强度，A为消光值（吸光度），ε为吸收系数，b为溶液的光径长度，c为溶液的浓度。从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液厚度一定时，透光率是根据溶液的浓度而变化的。

分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。

分光光度计工作原理及特点

分光光度计特点

独特的双光路、双光束光学系统，仪器分辨率更高，杂散光更低，稳定性、可靠性更强，分析更加准确；

采用320*240位点阵式高亮6 ”液晶显示器，显示清晰，信息完备；

独特的长光程光路设计，使仪器分辨率更高，尤其适合微量测试强大的数据处理功能，使测试结果能得到充分的应用，用户编辑更为简单快捷；

采用悬架式光学系统设计，整体光路独立固定在16mm厚的铝制无变形基座上，底板的变形和外界的震动对光学系统不产生任何影响，从而大大提高了仪器的稳定性和可靠性；

采用同步正弦机构，波长准确度高，重复性好；

采用ARM系统；

0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0六档光谱带宽自动可选，满足不同用户的测量需求；

24位高速、高精度A/D转换，仪器精度更高、反应速度更快；

主要元件采用进口配置，使仪器杂散光更低、稳定性、可靠性更强；

功能更加强大，主机可独立完成光度测量、定量测量、光谱扫描、动力学、DNA/蛋白质测试，多波长测试及数据打印等功能；

充分考虑不同用户的使用习惯，本系列仪器都标配元析公司光谱扫描软件，联机操作时，除能实现主机的所有测试功能外，还可实现更为强大的数据处理功能，并且使数据存储达到无限。

分光光度计工作原理及特点

波长的选择

波长的选择一般是选择待测物质吸收峰的波长（λmax）。因在λmax测定吸光度，敏感度。在吸收峰波长处测吸光度，波长变化影响；而在其他波长处，波长变化对吸光度影响大，甚至测得浓度一吸光度曲线不呈直线。

选择测定某一溶液所需的波长，是可以用不同的波长作该溶液的吸收光谱曲线，从曲线上选择适当的波长来进行这一溶液的测定工作，但是，在分析工作中，尚有个别情况，不能单凭此一原则，而应根据下列三个原则，进行实际试测，然后全面考虑利弊，再行选定。

1．应使被测溶液有适当的光密度，一般而言，适当的光密度为0.1—0.7，而以0.2—0.6理想。过低的光密度因仪器的读数误差而产生很大的相对误差，反之，过高的光密度则往往已超过直线范围而引入误差。

2．应使干扰影响降低至限度。在反应中，如遇不易去除的干扰色泽，应选用对此干扰色泽不灵敏的波长。

3．应使标准曲线在尽可能大的范围内接近直线。

721型分光光度计的构造

721型分光光度计允许的测定波长范围在360～800nm，其构造比较简单，测定的灵敏度和精密度较高。因此，应用比较广泛。

从光源灯发出的连续辐射光线，射到聚光透镜上，会聚后，再经过平面镜转角90°，反射至入射狭缝。由此入射到单色器内，狭缝正好位于球面准直物镜的焦面上，当入射光线经过准直物镜反射后，就以一束平行光射向棱镜。光线进入棱镜后，进行色散。色散后回来的光线，再经过准直镜反射，就会聚在出光狭缝上，再通过聚光镜后进入比色皿，光线一部分被吸收，透过的光进入光电管，产生相应的光电流，经放大后在微安表上读出。